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这个纯化步骤说明,不同的纯化手段必须加以精心组合才会有最好的效果。(十一)核抽提物 上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备 也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白,如果大概知道蛋白在什么细胞器官,把 细胞器先分离出来作为纯化的起始原料,可以省好多事情。
V5标签,是猿猴病毒5(SV5)副粘病毒P和V蛋白上存在的小表位(Pk)短肽,序列为RNA聚合酶α亚基的95-108位氨基酸残基GKPIPNPLLGLDST,可被融合到目标蛋白的N或C末端。在文献报道中,大多将V5融合到目标蛋白C端,常用于哺乳动物和昆虫细胞表达系统蛋白质印迹,免疫荧光和免疫沉淀检测。
不算累。蛋白质纯化车间应该不累,投料是最累的部分,主要看规模了,主要是以扳阀门为主。
在蛋白质纯化过程中,尽管电泳在基因表达产物检测中有广泛应用,但在实际纯化步骤中,它并不常用。有时需要***用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行特殊目的的纯化。
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